Western Blot 是一种用于检测特定蛋白质在细胞或组织样本中的表达水平和相对含量的技术。这项技术结合了凝胶电泳分离蛋白、转膜以及抗体特异性识别等步骤，从而实现对目标蛋白的精准定位与定量分析。以下是 Western Blot 技术的基本工作流程：
首先，将待测样品中的蛋白质通过 SDS-PAGE（十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳）进行分离。这一过程基于蛋白质分子量的不同，使不同大小的蛋白质在凝胶中以梯度形式迁移，最终形成清晰的条带分布。
接着，利用电转移装置将凝胶上的蛋白质转移到硝酸纤维素膜或 PVDF 膜上。此步骤确保了蛋白质能够均匀地附着于膜表面，并为后续的免疫反应提供稳定的支持。
随后，在封闭缓冲液中处理膜以阻断非特异性结合位点。然后使用一抗孵育膜，该抗体能特异性识别目标蛋白。经过充分洗涤后，再加入二抗进行孵育，二抗通常标记有酶或者荧光物质以便于信号放大及检测。
最后，通过化学发光法或显色反应来可视化目标蛋白的位置和强度。对于化学发光检测，需曝光至 X 光片或使用 CCD 成像系统记录下结果；而对于显色检测，则可以直接观察到颜色变化。
总之，Western Blot 技术以其高灵敏度、特异性强等特点广泛应用于基础研究、临床诊断等领域，为深入理解生命现象提供了强有力的支持工具。
